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英文名称: Streptavidin, AF430 conjugate,AF430 Streptavidin,Alexa Fluor430 Streptavidin
中文名称: AF430标记的Streptavidin,AF405标记的链霉亲和素,链霉亲和素偶联AF430,链霉亲和素,AF430偶联物
激发波长:434nm
发射波长:539nm
运输:低温运输
包装:瓶装
展开剩余88%二、功能结构与组成AF430 Conjugate Streptavidin(链霉亲和素-Alexa Fluor 430偶联物)是链霉亲和素与Alexa Fluor 430(AF430)荧光染料通过共价键偶联形成的生物探针。
链霉亲和素源自链霉菌,为四聚体蛋白(分子量53-60 kDa),每个亚基可特异性结合生物素,形成超强非共价相互作用。
AF430是磺化荧光素衍生物,激发波长434nm,发射波长539nm,兼具高量子产率、抗光漂白性及宽pH耐受性(4-10)。
该偶联物结合了链霉亲和素的高特异性结合能力与AF430的荧光特性,广泛应用于免疫荧光、流式细胞术、多色成像及生物传感器开发,是生物医学研究中的核心荧光标记工具。
化学结构特点
链霉亲和素结构:四聚体蛋白,每个亚基含159个氨基酸,形成β-桶状结构,可结合4个生物素分子。非糖基化、近中性等电点(pI≈5-6),减少非特异性结合。
AF430染料结构:磺化荧光素衍生物,含磺酸基团增强水溶性,通过NHS酯与链霉亲和素的氨基共价偶联,形成稳定酰胺键,保留生物素结合活性与荧光性能。
偶联方式:采用活性酯法(如AF430-NHS),在温和条件(pH 7.2-8.5,室温)下反应,偶联比通常为1-4个染料分子/链霉亲和素亚基,确保高荧光信号与生物素结合能力。
主要应用范畴
AF430 Conjugate Streptavidin 是生物医学研究中不可或缺的“胶水”试剂,广泛应用于以下领域:
免疫学与细胞学
流式细胞术(FACS):用于检测细胞表面标记物或细胞内抗原。
免疫荧光染色:用于组织切片或细胞的免疫荧光染色,尤其是需要多色共标时的信号放大。
分子生物学
ELISA(酶联免疫吸附实验):作为酶底物的替代物,用于检测生物素化的抗原或抗体。
Western Blot(蛋白印迹):在二抗孵育后使用AF430-Streptavidin进行荧光显影。
细胞生物学与化学
细胞表面糖型分析:通过链霉亲和素桥接带有特定糖结合能力的探针,研究细胞表面糖链的分布。
高通量筛选
药物筛选:在高通量实验中,用于快速、灵敏地检测目标分子的结合情况。
三、AF430 Conjugate Streptavidin 用于检测生物素化的抗原或抗体原理是什么?应用中有什么优势?检测原理
AF430 Conjugate Streptavidin 的检测原理主要基于两大核心机制:
1. 生物素-链霉亲和素特异性结合(核心原理)
高亲和力:链霉亲和素是一种天然的生物素结合蛋白,能够以极高的亲和力(Kd ≈ 10^-14 M)结合生物素。这种结合力比抗原-抗体之间的结合力还要强。
特异性捕获:在检测体系中,首先需要有生物素化的一级识别分子(如生物素化抗体或生物素化抗原)。AF430 Streptavidin 通过其 Streptavidin 部分特异性识别并结合这些生物素分子,将 AF430 染料引入到目标分子上,从而完成信号的“捕获”。
2. 荧光信号检测(二级检测)
AF430 染料特性:AF430(Alexa Fluor 430)是一种蓝光激发的有机荧光染料,激发波长约为 434 nm,发射波长约为 539 nm。它具有高亮度和良好的光稳定性,能够在流式细胞仪或荧光显微镜下发出清晰的绿色荧光。
信号放大:由于链霉亲和素通常含有多个生物素结合位点(四聚体结构),一个 AF430 Streptavidin 分子可以结合多个生物素标记分子,进而实现荧光信号的放大。
应用优势
相较于其他检测方法,AF430 Conjugate Streptavidin 在实际应用中具有以下显著优势:
1. 极高的特异性和亲和力
低背景:生物素-链霉亲和素体系的亲和力极高,这意味着即使在极低浓度的目标物(如 10^-14 M)下,AF430 Streptavidin 也能稳定结合,显著降低了非特异性背景干扰。
信号放大:一个 Streptavidin 分子通常含有四个生物素结合位点,这种多价结合特性能够将信号放大数倍,提高检测灵敏度。
2. 稳定性强,兼容性好
抗非特异性结合:该产品不含糖基链,等电点低(约6.0),这有助于减少与细胞或组织的非特异性结合,从而降低假阳性率。
耐受性强:AF430 Streptavidin 对极端 pH 条件(如 pH 4–10)、高温以及去污剂(如 SDS)具有良好的耐受性,适合复杂样本的检测,如组织切片、细胞悬液或变性样本。
3. 多场景兼容性
广泛应用:由于 AF430 是一种荧光染料,该试剂可广泛应用于流式细胞术(FACS)、荧光免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学(ICC)、免疫荧光(IF)等多种平台。
光学优势:在超分辨率显微成像(如 STED)中,AF430 的光学性能表现优异,能够突破光学衍射极限,实现纳米级分辨率的精确定位。
4. 便捷的二级检测方案
标准化流程:在酶联免疫吸附实验(ELISA)中,AF430 Streptavidin 常常作为一种“二级探针”使用。其标准流程为:生物素化二抗 → 加入 AF430 Streptavidin → 荧光检测。这种模块化的方案降低了实验的操作难度。
四、关联试剂Sulfo Cyanine3 NHS ester
Sulfo Cy3 NHS
Sulfo-Cy3-Iodoacetamide
Cyanine3.5 azide
Cyanine 3 Tyramide
Tyramide-Cy3
Sulfo-Cy3 Tyramide
Cyanine3-PEG-LA
N-(acid-PEG3)-N-bis(PEG3-NH2)
Ac4ManNAl
7-AMCA NHS ester
6-Rhodamine X NHS ester
Boc-NH-PEG-amine
Texas Red NH2
Alkyne choline
Azide C2 NHS
Biotin-PEG3-oxyAmine HCl salt
Texas Red maleimide
3-Azidopropanoic acid NHS ester
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